1. オンラインフィルターを使用する
インラインフィルターは、オートサンプラーとクロマトグラフィーカラム(またはガードカラム)の間に配置されます。一般的なインラインフィルタは、交換可能なフリット(0.5μmまたは0.2μm)を備えたステンレス鋼インラインフィルタと使い捨てPEEKに分けられます。異なる材料で作られたオンラインフィルターの場合、一般に、クロマトグラフィーカラムフリットプレートを塞ぐ可能性のある粒子を効果的に遮断するために、カラムフリットプレートよりも小さな開口を有するふるいプレートを選択する必要があります。機器の圧力が上昇し始めることが判明したら、インラインフィルターフリットが目詰まりし始めている可能性があり、完全に詰まる前に更新する必要があります。
インラインフィルターはメンブレンと同じように機能しますが、追加の作業は必要ありません。サンプルを遠心分離した後も、少量の粒子が装置に入る可能性があり、残留粒子はクロマトグラフィーカラムの前にあるインラインフィルターによって遮断することができます。さらに、オンラインフィルタの利点は、シンプルで簡単に交換できることです。一般的に、交換に5分しかかからず、使用のために再起動することができ、再調整やキャリブレーションに時間を費やす必要はありません。もう1つの利点は、インラインフィルタが、機器内の一部の部品の経年劣化による摩耗によって生成された粒子をフィルタリングできることです。私は、すべての液相装置にインラインフィルターが装備されていることを強く主張します。ガードカラムを使用する場合でも、ガードカラムの前にインラインフィルターを設置することもお勧めします。
2. ガードカラムを使用する
ガードカラムは、クロマトグラフカラムの前に設置された短いクロマトグラフィーカラムです。それは一般的に1〜2cmの長さであり、パッキングは使用されるカラムのパッキングと一致し、使用されるフリットの孔径はカラムで使用されるフリットの孔径より大きくない。ガードカラムには2つの機能があります:(1)カラムをブロックする可能性のある粒子をブロックすることができます。(2)ガードカラムとカラムパッキングが一致しているため、ピーキングせずにカラムパッキングと不可逆的に相互作用する可能性のある化学不純物は、まずガードカラムによって捕捉される。
ガードカラムを使用すると、カラムの寿命を確実に延ばすことができます。ただし、ガードカラムを使用するかどうかを検討する前に、次の点を評価することをお勧めします。
(1)ガードカラムは安くないので、ガードカラムの購入コストがカラムの寿命の増加によって補うことができるかどうかを検討してください。
(2)ガードコラムの寿命はどのくらいですか?交換が遅すぎるため、クロマトグラフィーカラムを汚染しないように、ガードカートリッジを交換する必要があるタイミングに注意を払う必要があります。
(3)ガードコラムを洗い流すには?フラッシングするときは、ガードカラムに蓄積された不純物をクロマトグラフィーカラムに洗い流さないように、ガードカラムとクロマトグラフィーカラムを別々に洗浄する必要があります。
(4)1~2cmのガードカラムの添加によるカラム効率の向上は期待できません。ガードカラムの設置はカラム長を長くすることと似ていますが、ガードカラムを使用するとコネクタと接続パイプが2本追加されるため、計器システムのカラム効率が低下するため、ガードカラムのないカラム効率を維持できれば良いでしょう。
言うまでもなく、ガードカラムの使用は確かにカラムの寿命を延ばすことができますが、各研究室がガードカラムの必要性を経済性と労力の観点から評価することをお勧めします。ガードカラムでもガードカラムとオートサンプラーの間にインラインフィルターを入れることをお勧めしますが、やっぱりインラインフィルターの交換はガードカラム交換よりも安く、ガードカラムとカラムの両方の寿命が延びます。
3. 未処理サンプルは入力しないでください
前処理の有無にかかわらず、注射前にすべてのサンプルをろ過または遠心分離することをお勧めします。例えば、試料をフィルターメンブレンでろ過して粒子を除去し、それによってクロマトグラフィーカラムのフリットの目詰まりを低減する場合、フィルターメンブレンの孔径はクロマトグラフィーカラムのフリットの孔径よりも小さくなければならない。一般に、3 μm を超える粒子を含むクロマトグラフィーカラムは 2 μm フリットを使用し、3 μm の粒子を含むクロマトグラフィーカラムは 0.5 μm フリットを使用し、3 μm 未満の粒子を含むカラムは一般的に 0.2 μm フリットを使用するため、一般的な 0.45 μm フィルターは基本的にサブ 2 μm の粒子を除くすべてのクロマトグラフィーカラムで使用できます。2 μm 未満の粒子を含むカラムでは、0.2 μm の細孔を持つフィルターが一般的に使用されます。ほとんどのフィルター膜はあらかじめパッケージ化されており、ろ過のためにシリンジに直接接続することも、96ウェルプレートのフィルタープレートとして使用することもできます。